Clara

Instrumentos em tempo real, compatíveis com a técnica de HRM.

Recomendamos a utilização de um dos seguintes termocicladores para produção de qPCR dos seguintes fabricantes:
Thermo: 7900, 7900HT, 7900HT FAST, StepOneTM, stepOneTM Plus, 7500, 7500FAST, Viia7TM
Bio-Rad®: CFX96TM, CFX384TM
Eppendorf: Mastercycler® ep realplex, Mastercyclers® realplex 2S
Illumina®: EcoTM
Qiagen/Corbett: 6000, Q
Roche Ciência Aplicada: Lightcycler®480, Lightcyclers®Nano BMS Mic

Modificações de sequência detectáveis
O ClaraTM HRM Mix pode distinguir todos os tipos de SNPs. Estes incluem:
Classe I: C a T e G a A
Classe II: C a A e G a T
Classe III: C a G
Classe IV: A a T

Além disso, esta mistura também pode ser usada para quantificar a metilação de CpG em uma sequência de alvo. Neste caso, o DNA potencialmente metilado é submetido a um tratamento com bisulfito antes de executar o qPCR do HRM com primers que visam regiões contendo CpG. Durante o tratamento com bisulfito, todos os resíduos de citosina não metilados são desaminados e, assim, convertidos em uracilo, enquanto todos os residuais de citossina metilada permanecem inalterados. A análise HRM sobre o bisulfito tratado versus uma amostra de controlo correspondente, não tratada, permite a estimativa da porcentagem de metilação da citosina do alvo, porque as sequências metiladas terão um teor de CG mais elevado em comparação com alvos não metilados após o tratamento com bisulfatos.

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